Efeitos de diferentes formulações comerciais de glyphosate sobre estirpes de Bradyrhizobium - Plantas Daninhas (2024)

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Planta Daninha, Viçosa-MG, v.22, n.2, p.293-299, 2004293Efeitos de diferentes formulações comerciais de glyphosate ...1 Recebido para publicação em 14.5.2003 e na forma revisada em 5.3.2004.2 Mestrando, Dep. de Fitotecnia da Universidade Federal de Viçosa – UFV, 36570-000 Viçosa-MG, <jbarbosasantos@yahoo.com.br>.3 Doutorando, Dep. de Solos – UFRGS, <rjsjacques@zipmail.com.br>. 4 Prof. do Dep. de Fitossanidade da Universidade Federal dePelotas – UFPEL, 96010-900 Pelotas-RS; 5 Professora, Dep. de Microbiologia – UFV, <mkasuya@ufv.br>; 6 Professor, Dep. deFitotecnia – UFV, <aasilva@ufv.br>; 7 Acadêmico de Agronomia, Dep. de Fitotecnia – UFV.EFEITOS DE DIFERENTES FORMULAÇÕES COMERCIAIS DE GLYPHOSATESOBRE ESTIRPES DE Bradyrhizobium1Effects of Different Glyphosate Commercial Formulations on Bradyrhizobium StrainsSANTOS, J.B.2, JACQUES, R.J.S.3, PROCÓPIO, S.O.4, KASUYA, M.C.M.5, SILVA, A.A.6 eSANTOS, E.A.7RESUMO - O objetivo deste trabalho foi avaliar efeitos de formulações comerciais deglyphosate sobre estirpes de Bradyrhizobium, em condições de laboratório. As formulaçõesforam aplicadas na concentração de 43,2 µg L-1 do equivalente ácido. As bactérias foraminoculadas em meio de cultura à base de manitol e extrato de levedura (YM). O efeito doherbicida no crescimento das estirpes de Bradyrhizobium foi avaliado mediante leitura dadensidade ótica em espectrofotômetro. Avaliou-se o crescimento das estirpes de B. japonic*msEMIA 5079 e de B. elkanii SEMIA 5019 e SEMIA 587 sob efeito de nove formulações deglyphosate: Zapp Qi , Roundup , Roundup Multiação , Roundup Transorb , Roundup WG ,Trop , Agrisato , glyphosate técnico [padrão de N-(phosphonomethyl) glycina] e controlesem adição de herbicida (testemunha para as estirpes). Foram utilizadas seis repetições.Confeccionaram-se curvas de crescimento para cada estirpe. Pelos resultados, pôde-seobservar que todas as formulações de glyphosate causaram efeitos diferenciados sobre asestirpes de Bradyrhizobium SEMIA 5019, SEMIA 5079 e SEMIA 587. Constatou-se que aformulação Zapp Qi foi a menos tóxica às estirpes de Bradyrhizobium avaliadas. A maiortoxicidade foi observada para Roundup Transorb, que provocou reduções no crescimentoacima de 94% para todas as estirpes de Bradyrhizobium estudadas. Não se observou correlaçãoentre o tipo de sal – isopropilamina, amônio ou potássico, presentes na formulação herbicida– e o grau de inibição no crescimento das estirpes. SEMIA 587 foi a estirpe menos toleranteà maioria das formulações testadas, porém SEMIA 5019 foi a mais sensível ao glyphosatepadrão, sem adição de sais ou de outros aditivos.Palavras-chave: fixação biológica de N2, herbicida, rizóbio, soja transgênica.ABSTRACT - This work aimed to evaluate the effects of glyphosate commercial formulations onBradyrhizobium strains under laboratory conditions. The formulations were applied in theconcentration of 43.2 µg L-1 of the a.e. and the strains were inoculated in yeast extract manitol(YM). Herbicide effect on the growth of the Bradyrhizobium strains was assessed by opticdensity reading in a spectrophotometer. Twenty seven treatments arranged in a factorial designwere evaluated and consisted of one strain of B. japonicum: SEMIA 5079; and two strains of B.elkanii: SEMIA 5019 and SEMIA 587, under the effect of nine glyphosate formulations: ZappQI , Roundup , Roundup Multiação , Roundup Transorb , Roundup WG , Trop , Agrisato ,technical glyphosate [N-(phosphonomethyl) glycine] and control without herbicide addition (as thestrain control treatment), with six replications. A growth curve was established for each strain. Itcould be observed that the different glyphosate formulations Zapp Qi, Roundup, Roundup Multiação,Roundup transorb, Roundup WG, Trop and Agrisato caused differentiated effects on the strains ofBradyrhizobium SEMIA 5019, SEMIA 5079 and SEMIA 587. It was verified that the Zapp Qiformulation was the least toxic to the strains. The highest toxicity was observed for RoundupTransorb, which reduced growth over 94% for all the strains assessed. Correlation was notSANTOS, J.B. et al.Planta Daninha, Viçosa-MG, v.22, n.2, p.293-299, 2004294observed among the type of salt, isopropylamine, ammonium or potassic, present in the formulationherbicides, and the toxicity degree to the strains. The strain SEMIA 587 was the least tolerant tomost formulations while SEMIA 5019 was the most sensitive to the control treatment N-(phosphonomethyl) glycine, without salts or other additives.Key words: biological fixation of N2, herbicide, rhizobium, transgenic soybean.afetar os microrganismos e, em certos casos,até modificar o efeito do agroquímico, porémpoucos trabalhos foram realizados sobre oassunto. Berner et al. (1991) mencionaram queaplicações de glyphosate, em formulações comou sem surfatante, inibiram o crescimentomicelial de Calonectria crotalariae.Objetivou-se neste trabalho avaliar atoxicidade das principais formulações deglyphosate comercializadas no Brasil sobre trêsestirpes comerciais do gênero Bradyrhizobium.MATERIAL E MÉTODOSO experimento foi realizado no Laboratóriode Associações Biológicas (FBN)/BIOAGRO,pertencente ao Departamento de Microbiologiada Universidade Federal de Viçosa, Viçosa –MG.As soluções-estoque das formulações deglyphosate foram preparadas mediante a mis-tura do produto comercial com água destiladae deionizada, sendo posteriormente esterili-zadas por filtração (filtro Milipore 0,25 µm) emcondições assépticas.As estirpes de Bradyrhizobium foramobtidas da Coleção de Bactérias Diazotróficasdo Centro Nacional de Pesquisa da EMBRAPA/Agrobiologia, sendo as culturas estocadas emfrascos de ágar inclinado com meio à base deextrato de levedura e manitol como fonte decarbono, meio YM, composto, em g L-1, por:manitol, 10; K2HPO4, 0,05; MgSO4, 0,02; NaCl,0,01; extrato de levedura, 0,5; ágar, 15; e pHajustado em 6,8, à temperatura de 4 oC. Aativação das estirpes foi feita mediante ino-culação em frascos erlenmeyer de 125 mL,contendo 50 mL de meio YM líquido, e incu-bação em agitador rotatório a 125 rpm e tempe-ratura de 25 oC. Uma alíquota de 15 µL dasestirpes ativadas foi inoculada em placas deELISA de 96 células com capacidade volu-métrica de 300 µL, contendo a mistura estérilINTRODUÇÃOO glyphosate é o herbicida de maior parti-cipação no mercado mundial de herbicidas, ca-racterizando-se pelo amplo espectro de ação epor não ser seletivo à cultura da soja. Existem,atualmente, mais de 90 marcas comerciais comesse ingrediente ativo no mundo (Heap, 1997).No entanto, esse herbicida poderá ser utilizadono Brasil diretamente na cultura da soja, casohaja introdução de cultivares resistentes aessas moléculas. Por inibir a síntese da enzima5-enolpiruvilshiquimato-3-fosfato sintase(EPSPs), a molécula de glyphosate bloqueia asíntese de aminoácidos aromáticos. Cultivaresde soja resistentes ao glyphosate contêm aenzima EPSPs insensível ao herbicida,todavia as bactérias fixadoras de N2, associadasao sistema radicular da soja, do gêneroBradyrhizobium, não apresentam essa insen-sibilidade enzimática, podendo o glyphosateinterferir na interação simbiótica. SegundoGonzalez et al. (1996), o risco de intoxicaçãode herbicidas sobre os microrganismos é maiorquando os produtos inibem processos bioquí-micos comuns entre as plantas e os micror-ganismos.Em outros países, foi constatado que oglyphosate provocou intoxicação em estirpesde rizóbios ou prejudicou a nodulação de legu-minosas, inclusive da soja (Mallik & Tesfai,1985; Schuls et al., 1985; Eberbach & Douglas,1989; Moorman et al., 1992; Haugland, 1994;Hernandez et al., 1999; King et al., 2001).Entretanto, em razão da grande variabilidadenas respostas de estirpes de rizóbio à presençade herbicidas (Kapusta & Rouwenhorst, 1973;Alagavadi & Reddy, 1986; Kishinevsky et al.,1988; Delanay et al., 1995), é importanteavaliar a natureza e a intensidade de respostadas principais estirpes utilizadas no Brasil.Segundo Malkones (2000), os aditivos pre-sentes na formulação dos agroquímicos podemPlanta Daninha, Viçosa-MG, v.22, n.2, p.293-299, 2004295Efeitos de diferentes formulações comerciais de glyphosate ...de 180 µL de meio YM líquido (1,33 vez concen-trado) e 60 µL da solução do herbicida, paracada tratamento, sendo imediatamente coloca-das em câmara de incubação a 25 oC e no escu-ro. O crescimento das estirpes foi avaliado pelaleitura da densidade ótica a 560 nm em espec-trofotômetro (Titertek Multiskan Plus MKII, NewYork, USA), em intervalos de quatro horas nasprimeiras 24 horas e, após, em intervalos de12 horas até a estabilização do crescimento.O delineamento experimental utilizado foio inteiramente casualizado em esquema fatorial3x9, totalizando 27 tratamentos, sendo estes acombinação de duas estirpes de B. elkaniiSEMIA 587 e SEMIA 5019, uma de B. japonic*msEMIA 5079 e nove formulações de glyphosate:Zapp Qi, Roundup, Roundup Multiação, RoundupTransorb, Roundup WG, Trop, Agrisato, PMG[padrão N-(phosphonomethyl) glycina com 99%de pureza] e o controle sem adição de herbicida,com seis repetições. Todas as formulações fo-ram aplicadas na concentração de 43,2 µg L-1,correspondente a 8,64 kg ha-1 de glyphosate,considerando área por área.Os resultados obtidos, após 122 horas deincubação, foram submetidos à análise devariância, e as médias, comparadas pelo testede Tukey a 5% de probabilidade. Também seutilizou análise de regressão para traçar curvasde crescimento bacteriano durante o períodode avaliação, para os diferentes tratamentosavaliados.RESULTADOS E DISCUSSÃOAs sete marcas comerciais testadas afeta-ram o desenvolvimento das estirpes; todavia,entre as formulações houve diferença no graude intoxicação (Figuras 1, 2 e 3 e Tabela 3).A estirpe SEMIA 5019 foi a mais sensívelà molécula pura do glyphosate (PMG) (Figura 1e Tabela 3). Para esta estirpe, as inibições má-ximas de crescimento medidas pelo aumentoda densidade ótica (DO), observadas entre ostratamentos, variaram desde 25,87%, paraZapp Qi, até 97,82%, para R. Transorb(Tabela 3). A formulação Zapp Qi (mais toleradapor esta estirpe) foi menos tóxica do que o pa-drão N-(phosphonomethyl) glycina (PMG),utilizado como controle para os herbicidas(Figura 1 e Tabela 3). As formulações Roundup(original), Trop, Agrisato e Roundup Multiaçãoforam semelhantes quanto à toxicidade a estaestirpe, proporcionando, em média, inibição docrescimento de 56% em relação ao controle(Figura 1 e Tabela 3). A formulação RoundupWG reduziu o crescimento desta estirpe emmais de 65%, comparado ao controle semadição de herbicida. Roundup Transorb afe-tou drasticamente esta estirpe (Figura 1e Tabela 3). Pelas equações das curvas deregressão, observou-se ausência de cres-cimento desta estirpe sob efeito de R. Transorb(Tabela 2).A estirpe SEMIA 5079 apresentou, quandosubmetida à formulação Trop, crescimentosimilar ao do controle (Figura 2 e Tabela 3). Asformulações Zapp Qi e Roundup Multiaçãoinibiram o crescimento desta estirpe em 22,79e 26,48%, respectivamente, em relação aocontrole sem adição de herbicida; contudo, 122horas após a inoculação, esses valores nãodiferiram significativamente do controleherbicida PMG (16,64% de inibição) (Tabela 3).Conforme pode ser observado na Figura 2, estaestirpe se mostrou altamente sensível àsTabela 1 - Formulações, fabricante e composição dos produtos comerciais de glyphosate utilizados Formulações comerciais* Fabricante Composição Formulação (expressa em equivalente ácido) Agrisato Alkagro Sal de isopropilamina Concentrado solúvel (360 g L-1) Roundup (original) Monsanto Sal de isopropilamina Concentrado solúvel (360 g L-1) Roundup Multiação Monsanto Sal de amônio Grânulos autodispersíveis em água (720 g kg-1) Roundup Transorb Monsanto Sal de isopropilamina Concentrado solúvel (480 g L-1) Roundup WG Monsanto Sal de amônio Grânulos autodispersíveis em água (720 g kg-1) Trop Milênia Sal de isopropilamina Concentrado solúvel (360 g L-1) Zapp Qi Syngenta Sal potássico Concentrado solúvel (500 g L-1) * Marca registrada do fabricante  . SANTOS, J.B. et al.Planta Daninha, Viçosa-MG, v.22, n.2, p.293-299, 2004296formulações Roundup (original), Agrisato eRoundup Transorb, visto estas terem reduzidoo crescimento em mais de 90%. Dessa forma,SEMIA 5079 sob efeito de tais herbicidas, naconcentração testada, em condições de labora-tório, apresentou desenvolvimento quase nulo.Novamente Roundup Transorb foi a formulaçãomais tóxica, sendo observada inibição no cres-cimento acima de 99%, em relação ao controle(Tabela 3), contudo não diferiu das formula-ções Roundup (original) e Agrisato (Figura 2 eTabela 3).0 25 50 7 5 10 0 12 5 0,0 0,1 0,2 0,3 0 ,4 C ontr ole Z ap p QI PM G R oundup Multiação R oundup WG T rop Agrisato R oundup Transorb R oundup (o riginal) DO (nm) T empo (hora s) DO (560 nm) Figura 1 - Efeito de diferentes formulações de glyphosate(43,2 µg L-1 de e.a.) sobre o crescimento da estirpe deB. elkanii SEMIA 5019 - média de seis repetições.Figura 2 - Efeito de diferentes formulações de glyphosate(43,2 µg L-1 de e.a.) sobre o crescimento da estirpe deB. japonicum SEMIA 5079 - média de seis repetições.Figura 3 - Efeito de diferentes formulações de glyphosate(43,2 µg L-1 de e.a.) sobre o crescimento da estirpe deB. elkanii SEMIA 587 - média de seis repetições.Tabela 2 - Equações das curvas de regressão relacionando densidade ótica (DO) e tempo de avaliação (horas), para diferentes formulações de glyphosate testadas sobre o crescimento das estirpes de B. elkanii SEMIA 5019 e SEMIA 587 e B. japonicum SEMIA 5079 Tratamento Equação* Coeficiente de determinação (R2) SEMIA 5019 Controle (sem herbicida) Ŷ =0,0079x/(1+0,0128x) 0,99 PMG** Ŷ =0,0026x/(1+0,0039x) 0,96 Zapp Qi Ŷ =0,0037x/(1+0,0050x) 0,98 Agrisato Ŷ =0,0004x/(1-0,056x) 0,99 Roundup Transorb Ŷ =(0,007-0,0008x) 0,86 Roundup WG Ŷ =0,0010x/(1-0,0005x) 0,98 Roundup Multiação Ŷ =0,0010x/(1-0,0033x) 0,95 Roundup (original) Ŷ =0,0010x/(1-0,0002x) 0,97 Trop Ŷ =0,0005x/(1-0,0051x) 0,95 SEMIA 5079 Controle (sem herbicida) Ŷ =0,7401x/(55,8535+x) 0,98 PMG** Ŷ =0,6505x/(55,1917+x) 0,99 Zapp Qi Ŷ =0,6673x/(57,6099+x) 0,99 Agrisato Ŷ =(0,0114+0,0001x) 0,84 Roundup Transorb Ŷ =(0,0118-0,0005x) 0,80 Roundup WG Ŷ =0,5460x/(85,6901+x) 0,98 Roundup. Multiação Ŷ =0,8037x/(115,9907+x) 0,97 Roundup (original) Ŷ =(0,0119+0,0001x) 0,79 Trop Ŷ =0,7430x/(63,0312+x) 0,99 SEMIA 587 Controle (sem herbicida) Ŷ =0,2170x/(30,5341+x) 0,98 PMG** Ŷ =0,1963x/(45,1041+x) 0,97 Zapp Qi Ŷ =1421,23x/(1,45E6+x) 0,95 Agrisato Ŷ =(0,0203-0,0001x) 0,82 Roundup Transorb Ŷ =(0,0195-0,0001x) 0,93 Roundup WG Ŷ =(0,0062+0,0001x) 0,85 Roundup Multiação Ŷ =(0,0056-0,00001x) 0,86 Roundup (original) Ŷ =(0,0223-0,0001x) 0,91 Trop Ŷ =(0,0157-0,00001x) 0,91 * Significativo pelo teste t (P<0,05) e ** produto puro padrão de N-(phosphonomethyl) glycina com 99% de pureza. Tempo (horas) 0 25 50 75 100 125 0,00 0,05 0,10 0,15 0,20 0,25 0,30 0,35 0,40 0,45 0,50 0,55 Controle Trop Zapp QI PMG Roundup Multiação Roundup WG Round up (original) Agrisato Roundup Transorb DO (nm) DO (560 nm) DO (560 nm) 0 25 50 75 100 125 0,00 0,02 0,04 0,06 0,08 0,10 0,12 0,14 0,16 0,18 0,20 Controle PMG Zapp QI Roundup WG Trop Rou nd up (original) Roundup Transorb Agrisato Roundup Multiação Tempo (horas) Planta Daninha, Viçosa-MG, v.22, n.2, p.293-299, 2004297Efeitos de diferentes formulações comerciais de glyphosate ...Com base nas equações referentes às cur-vas de regressão dos tratamentos, para SEMIA5079 (Tabela2), nota-se comportamentolinear desta estirpe sob efeito das formula-ções Roundup (original), Agrisato e RoundupTransorb, inclusive com valores decrescentespara esta última.SEMIA 587 foi, de maneira geral, a estirpemais sensível às formulações do glyphosatetestadas, visto que, entre estas, cinco impossi-bilitaram seu crescimento (Figura 3). Mesmocom o decréscimo no valor máximo de DO, foipossível observar que, além do tratamento con-trole (sem adição de herbicida), a estirpe apre-sentou crescimento somente nas formulaçõesZapp Qi e PMG (controle herbicida) (Figura 3 eTabela 3). O controle PMG, após 122 horas deincubação, não apresentou diferença quandocomparado ao controle sem herbicida; já nessemesmo período a formulação Zapp Qi inibiuem 32,59% o crescimento (Tabela 3). Pormeio da análise das curvas de crescimento(Tabela 2), pôde-se constatar que as formu-lações Agrisato, Roundup Transorb, RoundupWG, Roundup Multiação e Roundup (original)reduziram de forma drástica o crescimento deSEMIA 587. Os dados ajustaram-se em equa-ções do primeiro grau, evidenciando com-portamento linear decrescente, exceto paraRoundup WG (Tabela 2). A formulação Troptambém resultou em alta inibição, alcançandovalor próximo a 80% após 122 horas de incu-bação (Figura 3 e Tabela 3).Haahtela et al. (1988) testaram o glyphosatepuro e na formulação comercial Roundup sobrevários microrganismos e observaram que asconcentrações entre 25 e 100 µg L-1 afetaramsignificativamente o crescimento de bactériasdo gênero Enterobacter; entretanto, houvemaior intoxicação quando elas foram tratadascom a formulação comercial na maior concen-tração.Em relação aos sais que integram asformulações estudadas, pouca inferência sepode fazer na discussão dos resultados. O salde isopropilamina compõe as formulaçõesAgrisato, Roundup (original), RoundupTransorb e Trop, as quais apresentaram dife-rentes graus de intoxicação às estirpes e entreelas. O sal de amônio presente na composiçãode Roundup WG e Roundup Multiação nãoconferiu a estes o mesmo grau de intoxicaçãopara as três estirpes (Tabela 2). No entanto,pode-se destacar que Zapp Qi, único que seapresenta com o sal potássico, foi a formulaçãoque se manteve menos tóxica a todas asestirpes, sendo, para SEMIA 587, o único trata-mento que se apresentou não-tóxico (Figura 3e Tabela 2).Com base nas curvas de regressão ecomparação das médias depois de 122 horasde inoculação, pode-se estabelecer a seguinteordem crescente de intoxicação dos herbicidasàs estirpes: Zapp Qi < PMG < RoundupMultiação = Roundup (original) = Agrisato =Trop = Roundup WG < Roundup Transorb,para SEMIA 5019; Trop < PMG = Zapp Qi =Roundup Multiação < Roundup WG < Roundup(original) = Agrisato = Roundup Transorb, paraSEMIA 5079; e PMG < Zapp Qi < Trop <Roundup (original) = Agrisato = Roundup WG= Roundup Transorb, para SEMIA 587.Entre as estirpes, a ordem crescente detolerância foi a seguinte: SEMIA 587 < SEMIA5019 < SEMIA 5079, para as formulações Trop,Roundup WG e Roundup Multiação; SEMIA587 = SEMIA 5079 < SEMIA 5019, paraAgrisato e Roundup (original); SEMIA 5019 <SEMIA 5079 = SEMIA 587, para o controleherbicida PMG; e SEMIA 587 < SEMIA 5079,porém sem diferirem de SEMIA 5019, paraTabela 3 - Efeito de diferentes formulações de glyphosate (43,2 µg L-1) sobre o crescimento de estirpes de Bradyrhizobium, medido por meio do aumento da densidade ótica (DO), 122 horas após inoculação DO 560 nm (%) Tratamento SEMIA 5019 SEMIA 5079 SEMIA 587 Controle 100,00 a A 100,00 a A 100,00 a A Trop 40,71 de B 96,27 ab A 22,72 c C Roundup (original) 43,81 de A 6,09 d B 7,45 d B Agrisato 42,21 de A 3,63 d B 3,82 d B Roundup Transorb 2,18 f A 0,79 d A 5,59 d A Roundup WG 34,88 e B 59,75 c A 2,89 d C Roundup Multiação 49,95 cd B 73,52 b A 1,44 d C Zapp Qi 74,13 b AB 77,21 b A 67,41 b B PMG* 56,47 c B 83,36 b A 89,11 a A Médias seguidas de letras iguais, maiúscula na linha e minúscula na coluna, não diferem entre si pelo teste de Tukey a 5% de proba-bilidade. * Produto puro padrão de N-(phosphonomethyl) glycina com 99% de pureza. SANTOS, J.B. et al.Planta Daninha, Viçosa-MG, v.22, n.2, p.293-299, 2004298Zapp Qi. A formulação Roundup Transorbcausou elevado grau de intoxicação entre todasas estirpes.A maior sensibilidade da estirpe SEMIA587, em relação a SEMIA 5019, também foiconstatada por Ortiz et al. (1989), quando cres-cida em meio contendo trifluralin. Arruda et al.(2001), trabalhando com herbicidas inibidoresda enzima AHAS, em diferentes concentrações,observaram que eles afetaram drasticamenteas estirpes de B. japonicum testadas, sendoestabelecidas diferentes ordens de tolerânciapara cada herbicida.A redução do crescimento das estirpesde Bradyrhizobium na presença do equiva-lente ácido e das formulações comerciais deglyphosate provavelmente se deve à inibiçãoda atividade da enzima EPSP sintase e à conse-qüente redução da síntese de aminoácidosaromáticos nas células bacterianas. Moorman(1986) não observou redução do crescimentodo Bradyrhizobium japonicum na presença deglyphosate quando aminoácidos aromáticosforam adicionados ao meio de cultura. É pro-vável que os efeitos específicos das formulaçõescomerciais de glyphosate no crescimento dasestirpes sejam decorrentes da presença dediferentes substâncias químicas na formulaçãodo herbicida, como solventes, surfatantes eagentes molhantes, que podem modificar oefeito do equivalente ácido do herbicida nosorganismos (Kishinevsky et al., 1988;Malkones, 2000).AGRADECIMENTOSÀ empresa Syngenta Proteção de Cultivos,pelo apoio financeiro.LITERATURA CITADAALAGAVADI, A. R.; REDDY, T. K. R. Effect of trifluralinon Rhizobium and its nodulation on groundnut. Pesticides,v. 20, p. 27-30, 1986.ARRUDA, J. S.; LOPES, N. F.; MOURA, A. B. Behaviorof Bradyrhizobium japonicum strains under differentherbicide concentrations. Planta Daninha, Viçosa, v. 19,p. 111-117, 2001.BERNER, D. K.; BERGGREN, G. T.; SNOW, J. P. 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